创建一个补充序列捕获探针文库

 

一个补充序列捕获探针文库(简称补充库)支持额外的序列捕获探针,这些探针在您创建一个合并序列捕获探针文库时被添加到具体的基础序列捕获探针文库中。当您创建一个补充库时,您首先需要选择一个“安捷伦目录”库作为基础库。然后eArray会使用您所提供的基因组片段,进行“序列捕获探针基因组叠瓦式设计”,来创建补充库中的序列捕获探针。对于“序列捕获探针叠瓦式设计”任务,eArray会使用与基础库中所设计探针相同的参数。补充库有一些重要的限制。请参阅本主题结尾的注释部分。

在您创建一个补充库之前

创建一个补充序列捕获探针文库

使用一个向导来创建一个补充库。请按照以下步骤来启动向导:

  1. 设置应用类型SureSelect Target Enrichment。

  2. 在“工作组”标签的首页中,在“序列捕获探针文库向导”下,选择通过序列捕获探针叠瓦式设计创建补充序列捕获探针文库,然后点击下一步。

    “通过序列捕获探针叠瓦式设计来创建补充库”向导会出现,首先出现的是第一步。向导的每个步骤如下所示。

步骤 1 – 序列捕获探针文库选项和目标详细信息

在此步骤,您需要选择一个基础序列捕获探针文库,并基于该基础库中探针叠瓦式设计参数来建立一个叠瓦式设计任务。更多关于序列捕获探针叠瓦式设计的信息,请参阅序列捕获探针叠瓦式设计

  1. 在“选择基础序列捕获探针文库”下,在序列捕获探针文库名称处,选择想要的基础库。可作为基础库的“安捷伦目录”库会出现在列表中。

    eArray在“设计选项”中设置大多数参数,基于您选择的基础库的叠瓦式设计参数。

  2. 在“设计选项”下,在设计任务名称中,输入一个用来识别此“叠瓦式设计”任务的名称。“设计选项”下的所有其他参数都是只读的,并且已被自动设置好。

  3. 目标详细信息下,输入您希望被叠瓦的基因组片段的信息,以及避免叠瓦的基因组片段信息。请参照以下详细信息:

参数

说明/详细信息

物种

(只读)所要设计的序列捕获探针的物种。eArray会根据所选择的基础库自动设置物种。

基因组版本

(只读)所要设计的序列捕获探针的基因组版本。eArray会根据所选择的基础库自动设置基因组版本。

基因组目标片段

输入希望叠瓦的目标片段。使用以下格式 chrX:<start>-<end>。多个片段用分隔符"|" 分隔。

示例 chr21:1000000-1500000|chrY:2000000-2300000

或者,您可以上传一个片段列表。创建一个 *.txt 文件,每行包含一个片段。每行用一个换行符号结束。(在文字处理软件中点击回车),然后参照一下步骤:

  1. 在“基因组目标片段”复选框旁边,点击上传。
    一个对话框会出现。

  2. 点击浏览。
    一个“选择文件”对话框会出现。

  3. 选择想要上传的文件,然后点击打开。
    文件名会出现在之前的对话框中的“文件名”处。

  4. 点击上传文件。
    eArray会上传该片段列表,并将它们显示在“基因组目标片段”框中,以分隔符分隔。

跳过叠瓦基因组片段

Mark any of these options:

  • 跳过屏蔽重复序列区域 – eArray会在序列捕获探针叠瓦式设计过程中排除重复基因组区域的集合。基因组中有些片段会产生低质量的序列捕获探针。默认情况下,此选项会被选中。如要查看如何定义标准重复区域,请点击此信息旁边的信息链接。

  • 跳过自定义片段 – 在序列捕获探针叠瓦式设计过程中,eArray排除那些您输入框中的基因组片段。使用以下格式 chrX:<start>-<end>. 多个片段用分隔符"|" 分隔。

    示例:
    chr21:1000000-1500000|chr5:6200000-6400000

    或者,您可以上传一个片段列表。创建一个 *.txt 文件,每行包含一个片段。每行用一个换行符号结束。(在文字处理软件中点击回车),然后参照一下步骤:

    1. 在“基因组目标片段”复选框旁边,点击上传。
      一个对话框会出现。

    2. 点击浏览。
      一个“选择文件”对话框会出现。

    3. 选择想要上传的文件,然后点击打开。
      文件名会出现在之前的对话框中的“文件名”处。

    4. 点击上传文件。
      eArray会上传该片段列表,并将它们显示在“基因组目标片段”框中,以分隔符分隔。

  1. 点击提交。

    向导的下一步会出现。
     

步骤 2 – 上传消息

在此步骤,一个消息会告知您,您的“序列捕获探针叠瓦式设计”任务已经被提交,在该任务完成后您将收到电子邮件通知。

当任务的状态为“序列捕获探针已被上传”时,您就可以继续向导了。
 

步骤3 – 对于序列捕获探针文库

在此步骤中,您需要定义补充库的特定参数。在您继续向导之前,您在之前步骤中提交的序列捕获探针叠瓦式设计任务的状态必须为“序列捕获探针已被上传”。

  1. 点击工作区标签,然后点击首页标签。

    您的工作区的首页会出现。

  2. 在“序列捕获探针文库向导”框的地步,在您提交的“序列捕获探针叠瓦式设计任务”旁边的操作栏中,点击继续。

    向导会再次出现。

  3. 在“定义序列捕获探针文库”下,输入序列捕获探针文库的参数。下表描述了会出现的参数。某些参数由系统设定,且不能被更改。

参数

说明/详细信息

序列捕获探针文库名称

为序列捕获探针文库输入一个名称。eArray使用此名称作为序列捕获探针文库的一个查找条件,也是在查找结果、列表、以及类似地方用来指代此序列捕获探针文库的方式。

基础序列捕获探针文库名称

(只读) 您在向导第一步选择的基础库的名称。

文件夹

为您新的序列捕获探针文库选择一个位置。那些您拥有访问权限的文件夹将出现在列表中。

内置质控序列捕获探针组

(只读) eArray自动为序列捕获探针文库选择一个合适的内置质控序列捕获探针组。安捷伦内置质控序列捕获探针组的名称会显示为一条链接。如要查看该内置质控序列捕获探针组的详细信息,请点击该链接。

所需的安捷伦内置质控序列捕获探针组包含用于在序列捕获探针文库生产过程中进行质量控制的序列捕获探针。

长度

(只读) 库中每个序列捕获探针包含的核苷酸数目。此数值与基础库中的一样。

描述

(选填) 为该序列捕获探针文库输入一个简要的描述。

序列捕获探针文库容量

 

(只读) 当前,eArray支持1 X 55K的序列捕获探针文库容量,可以承载57,750个序列捕获探针。

如要查看更多信息,请点击显示详细信息。

关键词

(选填) 输入新的查找关键词来与该序列捕获探针文库关联,用逗号分隔。指定关键词可以帮助您稍后来查找此序列捕获探针文库。

物种

(只读) 与此序列捕获探针文库关联的物种。

备注

(选填) 输入一段备注来包含在序列捕获探针文库中。

附件

(选填) 附件就是与您的序列捕获探针文库相关的文件或链接。附件文件最大可以有32 MB。如要添加一个或多个附件,请参照以下步骤:

  1. 点击 plus_minus_icon.gif
    一个页面将在一个新窗口中出现。

  2. 在“添加附件”框中,指定以下信息:

名称 – 为附件输入一个名称。此名称将成为您访问附件而用来点击的链接。

类型 – 从列表中选择想要添加的附件的类型。一个附件可以使一个文件或是一个URL。

位置 – 从列表中选择恰当的位置。eArray使用此选项来选择已在您的区域中定位的内容,如果该内容可用的话。

文件 – (仅当您选择附件类型为“文件”时) 点击浏览... 在出现的对话框中选择想要添加的附件,然后点击打开。

URL – (仅当您选择附件类型为“URL”时) 输入因特网资源的位置URL,包括协议说明符。例如,http://www.agilent.com。

  1. 点击添加。
    附件将出现在窗口顶部的“附件标题列表”中。会显示一个成功消息。

  2. 点击关闭。

  3. 如需要,可添加更多附件。
    如果您添加的一个附件出错,在“附件标题列表”中选中它名称旁边的复选框,然后点击移除。

  4. 点击完成。
    窗口将关闭。您的附件的名称作为链接出现在“附件”处。.

  1. 点击下一步。

    向导的下一步将出现。
     

步骤 4 – 布局序列捕获探针

在此步骤中,您查看补充库的内容和统计数据。

  1. 查看出现在此步骤中的信息。全部项目均为只读,您无法修改序列捕获探针文库的序列捕获探针内容。

信息

描述

序列捕获探针组详细信息

序列捕获探针组名称

序列捕获探针组名称,该探针组包含您之前提交的“序列捕获探针叠瓦式设计”任务所创建的序列捕获探针。如要查看详细信息,请点击该名称。

对照类型

补充库中的序列捕获探针组的对照类型永远为生物性。该对照类型对该库的组成没有影响,在这里供用户参考。

重复

对于补充库中的序列捕获探针组,此参数永远为1。

  • 注意:eArray会自动将尽可能多的完整序列捕获探针集合包含进序列捕获探针文库的可用空间中。

    示例:您的序列捕获探针文库包含12,000个序列捕获探针,包括所需的安捷伦对照序列捕获探针。一个1 X 55K序列捕获探针文库格式的容量为57,750序列捕获探针,eArray就会在您的序列捕获探针文库中包含四个完整的序列捕获探针集合(12,000 x 4 = 48,000 baits)。如果包含五个集合则探针数目超过序列捕获探针文库格式承载量 (12,000 x 5 = 60,000 baits)。

序列捕获探针文库统计数据

填充百分比

序列捕获探针文库中被序列捕获探针填充的特征点百分比。

可用特征点数

序列捕获探针文库中未被使用的特征点数目。这些特征点没有序列捕获探针。

特征点总数

该序列捕获探针文库上可承载的最大序列捕获探针数目。当前,eArray支持1 X 55K的序列捕获探针文库容量,可以承载57,750个序列捕获探针,包含所需的安捷伦质控对照序列捕获探针。

用户对照探针数

eArray当前不在补充库中支持用户对照序列捕获探针,因此此数据为0。

安捷伦对照探针数

合并序列捕获探针文库中的安捷伦质控对照序列捕获探针数目。

  1. 请进行一下操作之一:

步骤 5 – 创建序列捕获探针文库

在此步骤中,您为您新创建的补充库选择一个状态,并创建该库。

  1. 选择以下选项之一:

  2. 进行以下操作之一:

      1. 点击设计检查清单。
        序列捕获探针文库检查清单会出现。

      2. 阅读并选中清单中的全部项目,然后点击完成。

      3. 点击保存。
        eArray会保存此补充序列捕获探针文库到您指定的位置,并提交其至安捷伦生产部门。一个消息会告知您,您在该库被成功提交至安捷伦生产部门后会收到电子邮件通知。

      4. 点击关闭。

在任何一种情况下,eArray都会创建该序列捕获探针文库,并保存到您指定的位置。一个消息会告知您,该库已被成功创建。

  1. 点击关闭。

    一个消息会告知您,文件写入正在进行中。

  2. 点击关闭。

    eArray会在“查看序列捕获探针文库”页面中显示该序列捕获探针文库的详细信息。关于详细信息,请参阅查看序列捕获探针文库

  1. 相关链接

创建一个合并库

序列捕获探针叠瓦式设计